プロトコール

• 細胞

マウス腹腔マクロファージ（PEC）の調製

マウス骨髄由来マクロファージ（BMDM）の調製



• 遺伝子導入，ノックダウン

Reverse transfectionによる培養細胞へのsiRNAの導入

組換えレンチウイルスによる遺伝子導入



• cDNAクローニング

アガロースゲル電気泳動

PCRによるcDNAクローニング／サブクローニング

コロニーPCR

Plasmid Mini Prep（簡易法／カラム法）

Plasmid Midi/Maxi Prep

cDNAへの変異導入



• タンパク質の検出

Lysis Buffer組成表

ウェスタンブロット [ver. 4]

ウェスタンブロット（マクロファージ培養上清）

免疫沈降

免疫蛍光染色 [ver. 3]

Time lapse microscopy [ver. 2]

Phos-tag SDS-PAGE [ver. 3]

なるほど!! ELISA



• ミトコンドリア関連

培養細胞からのミトコンドリアの単離

ミトコンドリアタンパク質の配向性解析

ミトコンドリア膜タンパク質の膜親和性解析



• タンパク質の精製

GST融合タンパク質の精製



• 遺伝子発現解析

Real-time PCR-I: Primer design

Real-time PCR-Ⅱ: Primer check (SYBR Green) [ver. 2]

Real-time PCR-Ⅲ: Real-time PCR (SYBR Green)



• 細胞応答解析

マルチモードプレートリーダーCytation 3の使い方

Accuri C6 Flow Cytometer メンテナンス

Caspase活性測定

共焦点顕微鏡を用いたCEPIAmtアッセイ（ミトコンドリア内Ca²⁺測定）

TUNELアッセイ



• マウス

マウス尾からのDNA抽出

PGAM5 KOマウス genotyping PCR



• 試薬調製

リコンビナントTaqの調製

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